**人B淋巴母细胞HMy2CIR培养指导说明**

**一、细胞培养条件**

在进行细胞培养时，请确保使用合适的细胞培养条件，以维持细胞的活性和增殖能力。推荐的培养环境为37℃、5% CO2。

**二、细胞接收后的处理**

收到细胞后，首先使用75%酒精对细胞瓶进行全方位消毒。随后，将细胞转移至超净工作台进行严格的无菌操作。细胞瓶应在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态的稳定。在显微镜下观察细胞的生长情况，并分别拍摄40x、100x和200x倍率的照片（每种倍率至少一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供照片，则默认收到的状态良好。

在细胞传代后，建议对一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行比较培养。在更换培养液时，请注意将瓶盖松动。

**三、细胞培养步骤**

**a、细胞传代**

若细胞汇合度未超过80%，需在培养瓶内收集完全培养液至离心管，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间在显微镜下观察细胞状态。当大部分细胞圆形脱落后，迅速将其移回操作台，轻敲培养瓶，加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱离后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，使用1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1：2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。

**b、细胞冻存**

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，当细胞收缩变圆后，添加5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，将沉淀细胞加入1ml尊龙凯时人生就博的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转移。

**c、细胞复苏**

1. 从液氮中取出冻存管时，请佩戴防护面具，并迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱继续培养。
4. 第二天，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

**四、注意事项**

细胞在运输过程中可能出现脱落，尤其是一些贴壁性不强的细胞。这属正常现象。如果观察到过多细胞脱离，可将所有培养液收集至离心管中，进行相应的离心操作并进行重悬和传代。请务必遵循上述步骤，确保细胞的健康状态。

**五、售后条款**

如细胞出现问题，需注意以下重发条件：

1. 因运输途中问题如丢失、瓶身破损等导致的细胞需重发。
2. 细胞污染请在48小时内提供实验结果，核实后可重发。
3. 对于常温发货的细胞如在收到后24小时内未存活，需提供细胞状态照片，核实后可重发。
4. 细胞活性问题请在7天内通过蓝染法确认，核实后可重发。
5. 如在收到后2-3天未提供照片，视为产品合格。

不予重发的情况包括因客户原因造成的污染或操作不当等问题。具体情况需结合实际情况而定。

如有疑问，请随时与我们联系，感谢您的信任与支持，愿您在细胞培养研究中取得优异成果！**尊龙凯时人生就博**始终陪伴您的科研之路。